УНИКАЛЬНОСТЬ ЛАБОРАТОРИИ «АГРОАНАЛИЗА» в комплексности исследований

В предыдущем номере нашей газеты опубликовано интервью директора украинского ООО «АгроАнализ» В. В. Дудки. В продолжение темы – рассказ о лаборатории, расположенной в г. Каховка Херсонской области. Ее уникальность заключается в проведении комплексного анализа и оказании практической помощи аграриям на основании достоверных данных. Лаборатория состоит из трех отделов: фитопатологического, бактериологического и агрохимического. С каждым годом оказываемые услуги становятся все более востребованными не только на Украине, но и в России, Молдавии. Предоставляем слово руководителям и специалистам лаборатории.

Валентина Александровна Польщан, заведующая лабораторией:

Бактериологический отдел занимается исследованием как растений, так и посевного материала на бактериозы. В своей практике мы столкнулись с тем, что сходство внешних признаков настолько велико, что отличить грибные заболевания от бактериальных очень тяжело. Например, увядание растений может быть фузариозным, вертициллезным и бактериальным. Внешне определить, какое это заболевание, как с ним бороться и получить необходимый эффект от этого лечения, практически невозможно. Лабораторная диагностика включает в себя два этапа: выделение бактерий и их идентификацию. И первый этап – это окраска по Граму и посев на питательные среды.

Исследуя под микроскопом окрашенные по Граму мазки-отпечатки (если это сочные ткани) или мазки-соскобы (если это сухие ткани), во-первых, мы можем увидеть форму бактерий (палочки, кокки или извитые), а во-вторых, по окраске бактерий определить, какие они – грамположительные (сине-фиолетовые) или грамотрицательные (красные). Известно, что бактериозы растений – это в основном грамотрицательные палочки, но для того, чтобы определить, какие же это конкретно бактерии, мы используем более сложные методы культивирования на различных питательных средах – накопления и растертого материала.

Метод накопления используется, когда на растениях еще нет поражения, и тяжело выделить, есть бактерии или нет. Если уже видно, что есть, то на границе здоровой и пораженной ткани отбираем участок, растираем в ступке, делаем суспензию с добавлением дистиллированной воды и наносим на определенную питательную среду, чтобы получить культуру бактерии. По культуральным свойствам – цвету, форме, расположению и др. – определяем род возбудителя, а его вид – по биохимическим свойствам. В дальнейшем, тестируя бактерии, мы выясняем, являются ли выделенные бактерии фитопатогенными.

Семенные инспекции часто при любом внешнем признаке (ослизнение, выделение экссудата) делают заключение о наличии бактериоза. Но даже если бактерии действительно есть, это совсем не значит, что они априори фитопатогенны. Ведь даже в желудке каждого человека есть бактерии, причем не только не опасные, а даже необходимые для организма, а вот если их нет, то это очень серьезное заболевание – дисбактериоз.

Основной прибор, который мы используем для исследований – исследовательский микроскоп производства компании «Carl Zeiss». Его функция – показать форму и цвет бактерии после окраски мазков по Граму. Все остальное – микробиологические методы: выделение возбудителя, посев на питательные среды, определение биохимических свойств. Для этого нужно соответствующее лабораторное оборудование: автоклав для приготовления питательных сред и обеззараживания, холодильник для их хранения при определенной температуре и влажности, сушильный шкаф для стерилизации посуды и т. д. Но самое главное – знания и опыт специалиста, который сможет сделать все так, как положено, и верно оценить результат.

Исследования проводятся в максимально стерильных и асептических условиях, потому что на питательных средах прекрасно растут любые бактерии, в том числе и находящиеся в воздухе. Для того чтобы исключить попадание на среду посторонних бактерий, рабочие боксы для розлива питательных сред оснащены бактерицидными лампами, постоянно контролируется микроклимат. Часто мы слышим от посетителей, что наша лаборатория по уровню стерильности напоминает медицинскую операционную. В бактериологической лаборатории так и должно быть.

Андрей Алексеевич Волошенюк, начальник фитопатологического отдела:

По основным визуальным признакам чаще всего невозможно определить со 100%-ной точностью, какой возбудитель вызвал заболевание растений. Это можно сделать с помощью специальных исследований на соответствующих приборах. Первичное микроскопирование мы проводим сразу же после получения образцов. Сначала выявляем наличие спороношения на стереомикроскопе с оптоволоконным осветителем в проходящем или отраженном свете. Если обнаруживаем споры, отбираем материал для изучения под биологическим микроскопом «Олимпус СХ41».

Отличительной особенностью грибов является то, что они имеют споры, характерные только для данного вида растений. Найденную спору можно сравнить с определителем, чтобы выявить не только род возбудителя, но и его вид, потому что морфологические признаки уникальны для каждого вида болезни. Если у нас яйцевидные темноокрашенные конидии с поперечными и продольными перегородками – это альтернария, если микроконидии овальные или яйцевидные серповидной или веретеновидной формы – это фузариум. Уже через два - три часа после поступления образцов мы определяем, каким возбудителем вызвано заболевание.

Далее образцы закладываем на проращивание во влажную камеру и через трое суток исследуем их повторно, чтобы спрогнозировать развитие болезни растения и обосновать проведение профилактических обработок. Лучше предупредить заболевание, чем его лечить.

Кроме того, мы проводим посев на питательные среды, потому что иногда на образцах растений одновременно присутствуют возбудители нескольких заболеваний, и при проращивании во влажной камере бывает сложно выделить единичные споры. Посев на селективные среды позволяет получить полное представление о присутствующих патогенах.

Микроскоп такого класса, как у нас, чаще всего применяют в медицине. Главное его достоинство – уникальное программное обеспечение с выводом изображения в режиме онлайн на монитор, с возможностью фото- и видеозаписи высокого разрешения на компьютер. Этот микроскоп позволяет делать измерение размеров спор с точностью до 1 нанометра, что имеет огромное значение при идентификации спор, точного определения нематод и т. д. С помощью «Олимпуса СХ41» мы делаем уникальные видеоматериалы, например, процесс питания нематод. Человек, один раз увидевший, с какой скоростью нематоды уничтожают растение, уже никогда не будет сомневаться в необходимости обработок.

У нас есть фотоархив, но мы не пользуемся им для иллюстрации результатов анализов. Наши клиенты получают снимки, сделанные по каждому конкретному образцу. Мы фотографируем найденные патогены и вставляем фотографии в отчет. Оптика позволяет увеличивать объекты исследования от 100 до 1000 раз, а программное обеспечение расширяет возможности до 6000 раз. С помощью такого микроскопа, специального программного обеспечения, компьютерной обработки данных мы оперативно определяем болезни с высокой точностью. Чтобы вырастить споры на питательной среде, нужно четыре - пять дней, а на определение патогена требуются считанные часы. При этом благодаря имеющемуся оборудованию мы застрахованы от ошибок.

Зайченко Елена Васильевна, лаборант агрохимического отдела:

Специалисты агрохимического отдела занимаются исследованием почвы, растений и воды. Для того чтобы на основе наших анализов сделать расчет минерального питания для конкретного поля, мы определяем практически все, что нужно для этого: содержание азота (общего и нитратного), подвижного фосфора, обменного калия, гумуса, кислотность и засоленность почвы, уровни содержания отдельных токсичных ионов (хлоридов, сульфатов, карбонатов и т. д.), катионно-анионный состав водной вытяжки и т. д.

Подобные измерения проводим и для воды, используемой для полива или опрыскивания, так как избыток солей может негативно повлиять на рост растений после полива, на эффективность рабочих растворов пестицидов. Ну и третье направление – работа с растениями. В них определяем почти все то, что и в почве – фосфор, калий, кальций, магний и др., чтобы знать обеспеченность растения элементами питания в данный момент, своевременно восполнить недостаток в том или ином из них и предупредить заболевание, возникающие при его дефиците.

В своей работе мы руководствуемся сертифицированными методиками (ГОСТ, ISO, ДСТУ), не придумываем ничего нового, используем традиционные методы (фотоколориметрию, турбидиметрию, потенциометрию, пламенную фотометрию, кондуктометрию, гранулометрию, титрометрию), и для этого имеются все необходимые приборы.

На фотоколориметре определяем содержание фосфора и серы в подвижной их форме, доступной для растений, фосфор – по оптической плотности, а серы – турбодиметрическим методом. Пламенный фотометр – прибор, позволяющий наиболее достоверно определять содержание обменного калия, а также ряда других химических элементов (Са, Na, Li, B и др.). Стационарные рН-метры с электронным преобразователем служат для определения в водных вытяжках рН трех видов – активной (водной), обменной (солевой) и гидролитической. Ионометрический преобразователь «Аквилон» предназначен для определения в почве нитратного азота, наиболее доступного для растений.

Для человека непосвященного некоторые моменты нашей работы кажутся излишне скрупулезными. Например, для того чтобы сделать анализ преобладающих в регионе карбонатных почв по Мачигину, мы готовим соответствующую вытяжку, которая должна выстояться 18 ч при определенной температуре (18 ºС), но в помещении температура колеблется, поэтому пробу ставим в суховоздушный термостат, который выдерживает заданные параметры.

Или, к примеру, определение концентрации солей (еС) по электропроводности. Кондуктометр дает общую картину содержания солей в пробе почвы, это скорее экспресс-анализ. Затем из той же пробы мы делаем анализ вытяжки, определяем в ней наличие хлоридов, гидрокарбонатов и т. д., и когда с помощью программы подсчитываем сумму солей, обычно она совпадает с показателями кондуктометра. И это важно – быть уверенным в результатах, которые мы передаем нашим клиентам.

В прошлом году наши специалисты подготовили рекомендации по практическому применению N-тестера – прибора для проведения на поле экспресс-анализа изменения уровня питания азотом в течение вегетации растений. В системе работы лаборатории в режиме онлайн это будет хорошим дополнением к общей картине того, что происходит на поле.

В. А. Польщан:

Сезон только начинается, но уже в феврале к нам начали поступать образцы почв из Молдавии, Ростовской области. И мы рады, что с открытием в середине апреля в г. Азов Ростовской области компании «АгроАнализ - Дон», которая будет функционировать автономно, наш опыт получит широкое распространение и в России, а наработанные данные послужат не только науке, но и практике.

Записала Людмила МАКАРОВА

Фото автора

ПОЛЬЩАН Валентина Александровна,
заведующая лабораториейООО «АгроАнализ», г. Каховка Херсонской области Украины.

Тел.: (10380553) 62-62-62.

Опубликовано в номере 4 за 2010 год

Перепечатка и копирование материалов на электронные ресурсы только с письменного разрешения редакции и с указанием первоисточника.